1.查找待測(cè)樣本的蛋白濃度:可以通過(guò)NCBI的文獻(xiàn),uniprot,pax-dab上給出的蛋白表達(dá)量參考值來(lái)比較ELISA試劑盒中給出的樣本值與報(bào)道值是否一致;
2.試劑盒的應(yīng)用種屬、檢測(cè)樣本的種類:除試劑盒特別說(shuō)明外,一般不同種屬不能通用。常見(jiàn)待測(cè)樣本種類有:血清和血漿(不同抗凝劑),細(xì)胞上清,和細(xì)胞裂解液,試劑盒中不同樣本的稀釋液不混用;
3.試劑盒的檢測(cè)范圍:也就是標(biāo)曲范圍,特別要注意待測(cè)樣本濃度是否落在標(biāo)曲范圍內(nèi),對(duì)于濃度很高的樣本,可以先進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)摸索到比較好的稀釋倍數(shù)后再大量測(cè)定樣本。
4.試劑盒中的稀釋線性及回收率:
a.稀釋線性一般指樣本稀釋線性,是將樣本梯度稀釋下來(lái),看各稀釋梯度濃度是否成線性;參考樣本稀釋線性可以選擇樣本的最佳稀釋倍數(shù);
b.稀釋線性也有做加標(biāo)稀釋線性的情況,加標(biāo)稀釋線性是將標(biāo)準(zhǔn)品加入樣本中測(cè)定加入的標(biāo)準(zhǔn)品濃度測(cè)定是否準(zhǔn)確;同樣也是確定待測(cè)樣本稀釋倍數(shù)的參考指標(biāo)。一般線性和回收率的范圍在80%-120%比較合適;
5.試劑盒的其它指標(biāo):
a.靈敏度:試劑盒能夠檢測(cè)到的樣本低濃度的能力,如果待檢指標(biāo)含量很低,需要選擇高靈敏度的ELISA試劑盒;
b.板間和板內(nèi)的變異系數(shù)(CV%):反映板內(nèi)和不同板之間是否均勻,CV%一般小于10% 比較好。
6.試劑盒的有效期:試劑盒的有效期一般是半年至一年,樣本準(zhǔn)備時(shí)間需要考慮到試劑盒的有效期。
7.試劑盒的特異性:ELISA 試劑盒的特異性與試劑盒的關(guān)鍵組分,抗體對(duì)有關(guān)。若抗體對(duì)中之一為多抗,另一個(gè)必須為單抗,建議使用雙單抗。
8.重復(fù)性:科學(xué)實(shí)驗(yàn)講求重復(fù)性,一般 ELISA 試劑盒,其板內(nèi)和板間變異系數(shù)應(yīng)該控制在 15% 以內(nèi)。
9.簡(jiǎn)便性:試劑盒在保證高質(zhì)量數(shù)據(jù)的情況下,實(shí)驗(yàn)時(shí)間越短,操作越便利,越容易受到用戶歡迎。這也不妨作為選擇試劑盒的一個(gè)指標(biāo)。
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