四川BBB搡BBB搡多人乱亂,99久久婷婷国产综合亚洲,久久久久久久97,全免费A级毛片免费看网站

咨詢電話

15821073967

當前位置:首頁  >  技術(shù)文章  >  豬偽狂犬病毒gD熒光PCR檢測試劑盒(實時熒光PCR法) 使用說明書

豬偽狂犬病毒gD熒光PCR檢測試劑盒(實時熒光PCR法) 使用說明書

更新時間:2025-01-08      點擊次數(shù):22

豬偽狂犬病毒gD熒光PCR檢測試劑盒(實時熒光PCR法)

使用說明書

【產(chǎn)品名稱】

通用名稱:豬偽狂犬病毒gD熒光PCR檢測試劑盒(實時熒光PCR法)

英文名稱:Porcine Pseudorabies virus gD gene Detection Kit (Real-Time PCR Method)

【包裝規(guī)格】 50T/盒

【預期用途】

豬偽狂犬病毒gD偽狂犬病毒gDPorcine Pseudorabies virusPPrV-gD)在分類學上屬皰疹病毒科豬皰疹病毒屬。本試劑盒利用實時熒光PCR原理,定性檢測PPrV-gD,PPrV引起的豬的疫病的診斷和監(jiān)控具有重要指導意義。

【原    理】

本試劑盒針對PPrV-gD高度保守區(qū)域設(shè)計特異性引物和探針,在反應體系中含PPrV-gD基因組模板的情況下,PCR反應得以進行并釋放熒光信號。利用儀器對PCR過程中相應通道的信號強度進行實時監(jiān)測和輸出,實現(xiàn)檢測結(jié)果的定性分析。

試劑盒組成】

序號

組成

50T/盒

1

PPrV-gD  PCR反應液

1000 μL×1管

2

PPrV-gD 陽性對照

 40 μL×1管

3

PPrV-gD 陰性對照

 40 μL×1管

4

說明書

1份

注:陰性對照為豬基因組DNA,陽性對照為PPrV-gD經(jīng)滅活處理的核酸提取物。

【儲存條件及有效期】避光-20℃以下保存,避免反復凍融,有效期12個月。

【適用儀器】ABI 系列、Bio-Rad系列、Agilent StratagDne MX系列、Roche LightCycler R480、Cepheid SmartCycler、Rotor-GDne系列、杭州博日系列等多通道實時熒光定量PCR儀。

【樣本要求】

1. 新鮮采集的咽拭子、鼻拭子標本,并使用滅菌生理鹽水懸浮。

2. 患病動物的腦、心、肝、脾、肺、腎、扁桃體等病理組織。

3. 標本收集后若不能立即檢測,可置于2~8℃冷藏過夜保存;如需長期保存,標本應凍存于-20℃~-80℃。

4. 標本保存期間應避免反復凍融。

【檢驗方法】

1. 試劑準備(試劑準備區(qū))

1)從冰箱中取出試劑盒, 從試劑盒中取出實驗所需試劑,充分融化混勻并瞬時離心以去除管壁附著液體。

2)核算當次實驗所需要的反應數(shù)(n),并根據(jù)如下表所示反應體系計算當次實驗所需要的各種試劑量。

n =陰性對照數(shù)(1T)+陽性對照數(shù)(1T)+誤差預留量(1T)+樣本數(shù)

單反液配制表(每份)

PCR反應液UNG酶及Taq酶)

20 μL

3)在無菌離心管中加入上述試劑,充分混勻后瞬時離心。按照20 μL/管分裝量將試劑分裝至PCR反應管。

4)蓋緊PCR反應管蓋后將PCR反應管轉(zhuǎn)移至樣本處理區(qū)。剩余試劑放回-20℃以下冰箱冷凍保存。

2.樣本準備(樣本處理區(qū))

QIAGDN、Roche公司DNA提取試劑盒提取DNA,具體操作按照其試劑盒說明書操作。

3.加樣

在上述制備好的PCR反應樣本管中分別加入處理好的待測標本DNA各5μl、終體積25μl/管,蓋好PCR反應蓋混勻后瞬時低速離心,轉(zhuǎn)移到PCR儀器上。陰性對照和陽性對照管則各加5μL試劑盒自帶的陰性對照或陽性對照品,終體積為25μl/管,蓋好PCR反應蓋混勻后瞬時低速離心,轉(zhuǎn)移到PCR儀器上。

4.PCR(PCR擴增區(qū))

1)取樣本處理區(qū)準備好的PCR反應管,放置在實時熒光定量PCR儀樣品槽相應位置,并記錄放置順序。2)按下表設(shè)置儀器核酸擴增相關(guān)參數(shù)進行PCR擴增。

反應體積

25 μL

通道選擇

HEX通道采集 PPrV-gD 熒光信號

PCR

反應

條件

步驟

條件

循環(huán)數(shù)

UNG處理

    37℃:2分鐘(min)

1

預變性

953分鐘(min)

1

PCR擴增

95℃:5秒(s)

40

55℃:40秒(s)

(此階段結(jié)束時采集熒光信號)

注:ABI系列熒光PCR儀在設(shè)置時不選ROX校正,設(shè)置淬滅基團選擇None。

【參考值(參考范圍)】

1.試劑盒有效性判定:

1)陽性對照:有典型S型擴增曲線或Ct值≤35。

2)陰性對照:Ct值>38或無Ct值,線形為直線或輕微斜線,無指數(shù)增長期。

2.標本結(jié)果判定:

1)陽性:標本檢測結(jié)果Ct值≤35或有明顯指數(shù)增長期。

2)可疑:標本檢測結(jié)果Ct值在35~38范圍內(nèi)。此時應對標本進行重復檢測,如重復實驗結(jié)果Ct值仍在35~38范圍內(nèi),有明顯指數(shù)增長期,則判定為陽性,否則為陰性。

3)陰性:標本檢測結(jié)果Ct值>38或無Ct值。

【檢驗結(jié)果的解釋】

通道及檢測結(jié)果

標本檢測結(jié)果解釋

HEX

+

標本中檢出PPrV-gD

-

標本中檢出PPrV-gD

【檢驗方法的局限性】

1. 當檢測樣本中被檢核酸濃度低于本試劑盒檢出可能會發(fā)生假陰性的結(jié)果。

2. 被檢樣本在采集、運輸、儲存以及處理過程中操作方式不當容易造成RNA降解而產(chǎn)生假陰性結(jié)果。

3. 樣本在采集、運輸、儲存以及處理過程中發(fā)生交叉污染,則容易得到假陽性結(jié)果。

【產(chǎn)品性能指標】 產(chǎn)品檢出限為103 Copies/mL,產(chǎn)品CV值≤3%。

【注意事項】

1. 使用本試劑盒的實驗室,應嚴格按照國家有關(guān)部分頒布的有關(guān)基因擴增檢驗實驗室管理規(guī)范進行管理;

2. 為避免RNA降解,樣本處理過程應在0-4℃條件下操作,且完成實驗后立即上機檢測;樣本處理過程中使用的器具耗材應經(jīng)過無核酶處理;

3. 各區(qū)域物品均為專用,不得交叉使用,以免污染;檢測結(jié)束后,應立即對工作臺清潔;

4. 吸取反應液時,應盡量避免產(chǎn)生氣泡; PCR 儀前,應注意檢查各反應管是否蓋緊,以免液體蒸發(fā)造成結(jié)果不準確;

5. 試劑盒所有試劑在使用前應該在常溫下充分融化混勻,并應瞬時離心;

6. 試劑盒內(nèi)所配陰性和陽性對照在第一次使用前應全部轉(zhuǎn)移至標本準備區(qū),并單獨存放

7. 為防止熒光干擾,應避免裸手直接接觸PCR反應管,并應避免在PCR反應管上進行任何標記

8. 檢測過程中使用過的吸頭,應直接打到盛有 10%次氯酸的廢物缸內(nèi),檢測結(jié)束的PCR 反應管,切忌開蓋,并與其他廢棄物品一同滅菌后丟棄工作臺及各種實驗用品應定期用 10%次氯酸、75%酒精或紫外燈進行消毒;

9. 儀器擴增相關(guān)參數(shù)應按照本說明書相關(guān)要求進行設(shè)置;不同批號試劑不能混用;并在有效期內(nèi)使用

       

 


©2025 上海雅吉生物科技有限公司版權(quán)所有 All Rights Reserved.     備案號:滬ICP備18032507號-3

技術(shù)支持:化工儀器網(wǎng)     管理登陸     sitemap.xml