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簡要描述:植物類黃酮檢測試劑盒(比色法),雅吉生物是一家生物企業(yè)主營ATCC細(xì)胞,細(xì)胞系,原代細(xì)胞和培養(yǎng)試劑,重組蛋白,ELISA試劑盒、抗體、熒光定量PCR檢測試劑盒
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2024-10-28詳細(xì)介紹
葉綠體是光合作用的細(xì)胞器,在光合作用研究中,常需要用提取的葉綠體展開下游研究工作,葉綠體中所含的色素主要有兩大類
,葉綠素(包括葉綠素a和葉綠素b)和類胡蘿卜素(包括胡蘿卜素和葉黃素),它們與類囊體膜上的蛋白質(zhì)結(jié)合,成為色素蛋白復(fù)合
體,其中葉綠素又稱葉綠體色素(Chlorophyll);類胡蘿卜素是一種脂溶性且具有營養(yǎng)特性的化合物,給植物和動物提供天然色素
,是重要的抗氧化劑,并有能力轉(zhuǎn)換為必需維生素,類胡蘿卜素可預(yù)防細(xì)胞,組織和基因損毀,增強身體免疫系統(tǒng),抵御感染,
減少癌癥風(fēng)險,保護心臟。
植物類黃酮檢測試劑盒(比色法)檢測原理是類胡蘿卜素不溶解于水,而溶于有機溶劑,以有機溶劑粗提類
胡蘿卜素,根據(jù)朗伯-比爾定律,某有色溶液的吸光度(A)與其中溶質(zhì)濃度(C)和液層厚度(L)成正比,即A=αCL,其中α為比例常
數(shù),當(dāng)溶液濃度以百分比濃度為單位,層液厚度為1cm時,α為該物質(zhì)的吸光系數(shù)。在本試劑盒情況下葉綠素a、葉綠素b、
類胡蘿卜素分別在665nm、649nm、470nm處有最大吸收波,根據(jù)經(jīng)驗公式可計算出葉綠素a、葉綠素b、總?cè)~綠素、類胡蘿卜
素含量,主要用于植物組織中葉綠素、類胡蘿卜素的提取以及以酶標(biāo)儀定量檢測葉綠素a、葉綠素b、總?cè)~綠素、類胡蘿卜素含量
。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域,不適用于臨床診斷或其他用途。
操作步驟(僅供參考):
自備材料:
1、蒸餾水
2、電子天平、研缽或勻漿器、離心管或試管
3、低溫離心機、恒溫箱或水浴鍋、酶標(biāo)儀、酶標(biāo)板
操作步驟(僅供參考):
1、準(zhǔn)備樣品∶
①植物樣品︰取1g植物組織或水果中層果肉,加入2.5ml PAL Lysis Buffer,冰浴情況下充分搗碎研磨或勻漿,4℃ 10000r/min
離心15~20min,留取上清液,-20℃凍存,用于苯丙氨解氨酶的檢測。
②血漿、血清和尿液樣品︰血漿、血清按照常規(guī)方法制備后可以直接用于該試劑盒的測定,-20℃凍存,用于苯丙解氨的檢測。
③細(xì)胞或組織樣品∶取恰當(dāng)細(xì)胞或組織裂解液,如果有必要需進行適當(dāng)勻漿,4℃ 10000r/min離心15~20min,取上清液,
-20℃凍存,用于苯丙酸解氨酶的檢測。④高活性樣品︰如果樣品中含有較高活性的苯丙解氨酶,可以使用蒸餾水或PAL
Lysis Buffer稀釋進行恰當(dāng)?shù)南♂尅?/span>
2、PAL加樣∶
取96孔板,按照下表設(shè)置對照孔、測定孔,溶液應(yīng)按照順序依次加入,并
注意避免產(chǎn)生氣泡。如果樣品中的PAL活性過高,可以減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再進行測定,樣品的檢測最好能設(shè)置2平行孔,
求平均值。
加入物(μl)對照孔測定孔
蒸餾水150100
待測樣本5050
PAL Assay Buffer-50
3、PAL檢測︰
以對照孔為對照(調(diào)零),酶標(biāo)儀立即測定290nm處測定孔的吸光度(記為 A測定0);40℃準(zhǔn)確孵育1h,立即加入10μl PAL終止
液終止反應(yīng)(備選方案),以對照孔為對照調(diào)零,酶標(biāo)儀立即測定290nm處測定孔的吸光度(記為A測定1)。
注意︰加入PAL終止液終止反應(yīng)為非必須步驟,可37℃準(zhǔn)確孵育1h后直接以對照孔為對照調(diào)零,酶標(biāo)儀立即測定290nm處測定
孔的吸光度。
注意事項∶
1、待測樣品中不能含有酶抑制劑,同時需避免反復(fù)凍融。
2、獲得上清液為PAL酶液,應(yīng)盡快檢測,亦可-20°℃保存。
3、如果沒有可測定紫外區(qū)的酶標(biāo)儀和酶標(biāo)板,也可以使用紫外分光光度計和石英比色皿,但應(yīng)注意比色杯的最小檢測體積。
4、每次檢測指標(biāo)不宜過多,否則操作時間不一,有可能導(dǎo)致樣本間的差異。5、為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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